Estudo importante – Objetivos
O objetivo do estudo foi investigar as atividades anticancerígenas da Ivermectina (IVM) e os possíveis mecanismos em nível celular via inibição da proliferação celular, apoptose e inibição da migração em células HeLa modelo de câncer.
Materiais e métodos
O ensaio MTT foi utilizado para estudar o efeito inibitório da IVM na proliferação de células Hela, e o ciclo celular foi analisado por citometria de fluxo. O ensaio do cometa neutro foi usado para estudar os danos no DNA. A presença de apoptose foi confirmada por coloração nuclear DAPI e citometria de fluxo. Alterações no potencial de membrana mitocondrial e níveis de espécies reativas de oxigênio (ROS) foram determinados usando coloração de Rodamina 123 e coloração DCFH-DA. A análise de Western blot para proteínas relacionadas à apoptose foi realizada. Usamos o teste de arranhão para analisar o potencial antimigração do IVM .
Resultados
A ivermectina pode inibir significativamente a viabilidade das células HeLa. Além disso, o tratamento com IVM resultou na parada do ciclo celular na fase G1/S, que é parcialmente responsável pela supressão da proliferação. Alterações morfológicas típicas de apoptose foram mostradas em células de tratamento IVM, incluindo fragmentação de DNA e condensação de cromatina. Ao mesmo tempo, os resultados da análise de citometria de fluxo mostraram que o número de células apoptóticas aumentou significativamente com o aumento da concentração de IVM. Além disso, observamos que o potencial de membrana mitocondrial colapsa e a proporção de Bax/Bcl-2 no citoplasma aumenta, o que induz a liberação de citocromo c da mitocôndria para o citoplasma, ativa a caspase-9/-3 e finalmente induz a apoptose. Também descobrimos que o IVM pode aumentar significativamente o conteúdo intracelular de ROS. Ao mesmo tempo,
Conclusões
Nossos resultados experimentais mostram que o IVM pode ser uma nova droga anticancerígena potencial para a terapia do câncer humano.
A ivermectina (IVM) é o derivado 22,23-di-hidro da avermectina B1 e é um importante membro da família das avermectinas de lactonas macrocíclicas de 16 membros que evoluem do actinomiceto Streptomyces avermectinius. 1 IVM foi originalmente usado como medicamento veterinário e foi muito eficaz para uma variedade de parasitas, como lombrigas gastrointestinais, vermes pulmonares e ácaros. 2
Acredita-se que o IVM atue no receptor de ácido gama-aminobutírico (GABA) e nos canais de cloreto controlados por glutamato. 3 Devido à baixa afinidade por outros canais controlados por ligantes de mamíferos, o IVM dificilmente atravessa a barreira hematoencefálica. Consequentemente, o IVM geralmente é considerado de baixa toxicidade para a saúde de adultos e aprovado para uso em humanos em todo o mundo. 4 Por exemplo, o IVM foi amplamente utilizado para o tratamento da oncocercose na forma de um medicamento gratuito, salvando a visão de inúmeras pessoas. 5 Os descobridores do IVM receberam o Prêmio Nobel de Fisiologia ou Medicina de 2015 devido ao seu efeito terapêutico muito bem-sucedido em muitas doenças parasitárias. 6Nos últimos anos, foi relatado que IVM exerce atividades anticancerígenas. No entanto, os papéis específicos da IVM no câncer permanecem obscuros.
O câncer é um grupo de doenças com características que envolvem crescimento celular anormal e descontrolado, potencial de penetração e difusão para outras partes do corpo, considerado a principal causa de morte no mundo. 7 Portanto, a pesquisa de drogas antitumorais com alta eficiência e baixa toxicidade tem sido o foco da descoberta de drogas. 8 A linha celular HeLa derivada de células de câncer cervical foi a primeira tentativa bem-sucedida de imortalizar células derivadas de humanos in vitro e tem desempenhado um papel análogo ao de um organismo modelo devido ao seu crescimento robusto e distribuição irrestrita. 9O câncer cervical é uma das neoplasias malignas mais comuns em todo o mundo, que se tornou o segundo tumor maligno feminino e representa uma séria ameaça à saúde e à segurança das mulheres. 10 Com base nesses dois pontos acima, optamos por utilizar células HeLa para nosso estudo.
A ivermectina demonstrou ter atividades anticancerígenas em vários tipos de câncer, incluindo glioblastoma, leucemia mielóide crônica e câncer de mama. 11 , 12 , 13 Devido à falta de pesquisas sistemáticas sobre a atividade anticancerígena da IVM em células HeLa, o objetivo deste estudo foi investigar a atividade e o mecanismo subjacente da IVM contra células HeLa e fornecer base experimental e fundamentação teórica para mais pesquisas sobre teoria e estudo clínico.
material enviado por Dra. Célia Wada
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Papel proangiogênico do circRNA-007371 na fibrose hepática
Os RNAs circulares (circRNAs) estão crucialmente envolvidos em cânceres como esponjas concorrentes de RNA endógeno (ceRNA) ou microRNA (miRNA). No entanto, a função e o mecanismo dos circRNAs na fibrose hepática permanecem desconhecidos e são o foco deste estudo. Modelos fibróticos murinos foram induzidos por tioacetamida (TAA) ou tetracloreto de carbono (CCl 4 ). O aumento da angiogênese é acompanhado por fibrose hepática em TAA- e CCl 4fígados fibróticos murinos induzidos. circRNA microarray e sequenciação de imunoprecipitação (RIP) de argonauta 2 (AGO2) (sequenciação AGO2-RIP) foram realizadas em fígados murinos para triagem de circRNAs funcionais. Em comparação com fígados de controle, 86 circRNAs expressos diferencialmente foram obtidos em fígados fibróticos murinos induzidos por TAA usando microarray de circRNA. Além disso, 551 circRNAs foram explorados por sequenciamento AGO2-RIP de fígados fibróticos murinos. O circRNA-007371 foi então selecionado e verificado quanto à junção com emenda reversa, resistência à RNase R e formação de loop. In vitro, células endoteliais de hemangioendotelioma murino (EOMA) foram transfectadas com plasmídeo superexpressando circRNA-007371 ou plasmídeo vazio. A superexpressão de circRNA-007371 promoveu a formação de tubos, migração e proliferação celular de células EOMA. O sequenciamento de RNA e o sequenciamento de miRNA foram então realizados para explorar o mecanismo dos efeitos pró-angiogênicos do circRNA-007371. O circRNA-007371 promove a fibrose hepática por meio de esponjas de miRNA ou mecanismos de ceRNA.Stag1 , o gene parental do circRNA-007371, pode desempenhar um papel significativo na progressão pró-angiogênica. Em conclusão, o circRNA-007371 aumenta a angiogênese por meio de um mecanismo de esponja de miRNA na fibrose hepática. O efeito antiangiogênico da inibição do circRNA-007371 pode fornecer uma nova estratégia para o tratamento de pacientes com cirrose hepática.
Introdução:
A cirrose hepática é o resultado da progressão da doença hepática crônica (CLD), que causa complicações graves, incluindo ascite, hemorragia varicosa, encefalopatia hepática e risco aumentado de carcinoma hepatocelular (CHC). 1 – 3 CLD e cirrose hepática levam a uma alta carga de doenças, com aproximadamente 2 milhões de mortes em todo o mundo a cada ano. 4 , 5 Múltiplos mecanismos fisiopatológicos participam da fibrogênese durante lesão hepática crônica, incluindo sinalização angiocrina, 6 – 9 ativação de células estreladas hepáticas (HSC) 10 , 11 e resposta inflamatória. 6 , 12Embora amplamente estudado, nenhum tratamento médico eficaz está disponível para reverter a fibrose em pacientes com cirrose hepática. Portanto, mais investigações são urgentemente necessárias para esclarecer o mecanismo da cirrose hepática para explorar novos alvos terapêuticos.
A angiogênese é definida como a formação de novos vasos sanguíneos a partir da vasculatura preexistente. 13 A angiogênese patológica leva a células endoteliais sinusoidais hepáticas disfuncionais (LSECs) no transporte e troca de oxigênio e nutrientes, aumenta o agravamento da inflamação e aumenta a resistência vascular, eventualmente levando à progressão da cirrose hepática. 13 , 14 Tradicionalmente, as vias do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) e do fator induzível por hipóxia (HIF) são reguladores principais na angiogênese patológica, 13 , 15 , 16 e os fatores angiocrinos em LSECs contribuem para a angiogênese patológica. 17 , 18No entanto, ainda não está claro se outros reguladores também contribuem para a angiogênese patológica.
Como RNAs endógenos não codificantes e covalentemente fechados, os RNAs circulares (circRNAs) são produzidos pelo RNA pré-mensageiro (mRNA) por meio de back-splicing. 19 Os circRNAs desempenham papéis cruciais nas doenças hepáticas como esponjas de microRNA (miRNA) ou RNAs endógenos concorrentes (ceRNAs). 19 , 20 Ao se ligarem ao mRNA parental, os miRNAs se combinam com a proteína argonauta (AGO) para formar um complexo silenciador induzido por RNA (RISC), que leva à degradação do mRNA, bloqueio da tradução e inibição da expressão do gene parental. 21 , 22 No entanto, como esponjas de miRNA ou ceRNAs, os circRNAs competem com os locais-alvo do miRNA-RISC, o que alivia ainda mais seus efeitos inibitórios nos genes parentais. 21 circRNAs podem regular a ativação de HSC23 , 24 e quiescência 25 , 26 por meio de esponjas de miRNA na fibrose hepática. Estudos anteriores enfatizaram os efeitos cruciais dos circRNAs na angiogênese no CHC. 27 , 28 No entanto, ainda não está claro a função e o potencial mecanismo dos circRNAs na angiogênese da fibrose hepática. Os circRNAs podem competir com os miRNAs para anular os efeitos inibitórios do miRNA nos genes parentais. Além disso, os miRNAs participam da angiogênese no contexto do CHC 29 , 30 e da fibrose hepática. 31 Se os circRNAs podem regular a angiogênese na fibrose hepática como esponjas de miRNA ou ceRNAs permanece inexplorado.
Este estudo teve como objetivo detectar a função pró-angiogênica e o potencial mecanismo dos circRNAs na fibrose hepática. O aumento da angiogênese é realizado com fibrose hepática em modelos fibróticos murinos. Conforme rastreado por circRNA microarray e sequenciamento de imunoprecipitação de RNA AGO2 (RIP) (sequenciamento AGO2-RIP) em fígados fibróticos murinos induzidos por tioacetamida (TAA), circRNA-007371 foi escolhido como o circRNA alvo. circRNA-007371 é caracterizado por back-splicing do exon 2 e exon 8 do antígeno estromal 1 ( Stag1). In vitro, a superexpressão de circRNA-007371 promoveu migração celular, formação de vasos e proliferação celular em células endoteliais de hemangioendotelioma murino (EOMA). Em seguida, os genes, miRNAs e vias de sinalização afetados por circRNA-007371 foram explorados em células EOMA superexpressando circRNA-007371 usando sequenciamento de mRNA e sequenciamento de miRNA. Juntos, o papel angiogênico do circRNA-007371 pode promover a fibrose hepática por meio de esponjas de miRNA ou mecanismos de ceRNA.
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Célia Wada – CRF- 7043
